In vitro uporedna procena osteogenog potencijala antibiotika ili neem-a u infuziji titanijumom-pripremljenog fibrina obogaćenog trombocitima
Autori:
Shiva Shankar Gummaluri, Trinath Kishore Damera, Anusha Boddeda, Tejaswi Kodem, Kaarthikeyan Gurumoorthy, Ramanarayana Boyapati
Preuzmite ceo članak u PDF formatu
Uvod/Cilj. Titanijumom-pripremljen fibrin obogaćen trombocitima (titanium-prepared platelet-rich fibrin – T-PRF) ima superiorna svojstva u pogledu vremena resorpcije, debljine, kapaciteta zadržavanja faktora rasta i postepenog oslobađanja na mestu hirurške intervencije. Cilj rada bio je da se procene vijabilnost ćelija i osteogeno diferentovanje osteoblastne ćelijske linije MG-63 posle izlaganja eluatima dobijenim iz ugrušaka T-PRF u koje su ubrizgani gelovi sa antibioticima [amoksiciliom/klavulanskom kiselinom – amoksiklav gel (AMX), metronidazolom – metronidazol gel (MET)] ili biljnim ekstraktima (neem gel). Metode. U ovoj in vitro studiji, sakupljena je krv i pripremljeni su T-PRF ugrušci. Antibiotski/biljni gelovi, zajedno sa T-PRF ugrušcima, dodati su u Dulbecco modifikovani Eagle medijum – DMEM kako bi se dobio eluat. Ovaj eluat je kasnije dodat kultivisanim osteoblastnim ćelijama kako bi se procenila vijabilnost ćelija 1, 3. i 7. dana primenom [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5 diphenyl tetrazolium bromide] (MTT) testa. Ekspresija gena [alkalna fosfataza (ALP), osteopontin (OSP), koštani morfogenetski protein-2 (bone morphogenetic protein-2 – BMP-2] proverena je 7. dana korišćenjem kvantitativne lančane reakcije polimeraze (quantitative polymerase chain reaction – qPCR), dok je bojenje alizarin crvenim S (alizarin red S – ARS) korišćeno za kasnu fazu osteogene diferencijacije i mineralizaciju matriksa 21. dana. Statistička analiza izvršena je korišćenjem GraphPad Prism softvera. Jednofaktorska analiza varijanse (analysis of variance – ANOVA) korišćena je za MTT test i za bojenje ARS, pri čemu je Tukey-ev post-hoc test primenjen samo za značajne rezultate ANOVA (podaci MTT testa 7. dana i bojenje ARS 21. dana). Kruskal-Wallis-ov test korišćen je za analizu qPCR. Rezultati. Značajno veća vijabilnost ćelija zabeležena je u grupi T-PRF + neem 3. dana (p = 0,0229) i 7. dana (p = 0,0034), dok je u grupi T-PRF + AMX značajno veća vijabilnost pokazana 7. dana (p = 0,0142) u poređenju sa samim T-PRF. Analiza qPCR pokazala je značajno povećanu ekspresiju OSP (p = 0,0422), ALP (p = 0,0203) i BMP-2 (p = 0,0290) u svim testiranim grupama (T-PRF + AMX/MET/neem) u poređenju sa kontrolnom grupom (samo T-PRF). Međugrupna poređenja nisu pokazala značajne razlike, osim između grupe T-PRF + neem i kontrolne grupe. Analizom ARS 21. dana otkrivena je najveća mineralizacija u T-PRF + neem, zatim u T-PRF + MET i T-PRF + AMX. Zaključak. Ugrušci T-PRF kako sa dodatkom antibiotika tako i sa dodatkom biljnog ekstrakta pokazali su superiorniji osteogeni potencijal u poređenju sa samim T-PRF. Zbog toga, T-PRF se može primenjivati kao sistem za produženo oslobađanje lekova.